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单抗常见问题
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多抗常见问题
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单克隆抗体制备抗原要求
 
        1 可溶性蛋白,浓度最好在1–5mg/ml之间,最小不得低于0.5mg/ml。
        2 胶免疫蛋白要求必须磨细,能顺利通过6#针头(或一次性5ml注射器的针头),经考马斯亮蓝染色的胶,需脱色,并将冰醋酸洗掉,含免疫蛋白(2mg以上)的胶的体积尽量控制在2ml以内,还需要提供可溶性蛋白用于抗体的筛选。

        3  多肽、氨基酸片段需偶联载体,用多肽(氨基酸片断)与载体偶联的蛋白进行小鼠免疫,用多肽(氨基酸片断)进行筛选。如多肽(氨基酸片断)不能进行抗体筛选,需再偶联另一种载体进行筛选。(载体一般为KLH、GST、BSA等。)

        4 不论注射何种状态蛋白,均不应含有叠氮钠、咪唑、尿素或其它有毒有害刺激性大的物质。甘油含量应低于20%。

        5 需要大于等于3mg的蛋白。

        6 蛋白的纯度大于90%。

        7 分子量小于20KD的蛋白免疫效果可能不理想。

        8 变性蛋白免疫产生的抗体跟天然蛋白有可能不发生抗原抗体反应。
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