1、可溶性蛋白，浓度最好在1–5mg/ml之间，最小不得低于0.5mg/ml。

　　2、切胶研磨的蛋白，必须磨细，能顺利通过9#针头（或一次性5ml注射器的针头），经考马斯亮蓝染色的胶，需脱色，并将冰醋酸洗掉。含免疫蛋白（3mg以上）的胶的体积尽量控制在3ml以内。

　　3、不论注射何种状态蛋白，均不应含有叠氮钠、咪唑、尿素或其它有毒有害刺激性大的物质。甘油含量应低于20%。

　　4、免疫一只兔子需要3mg蛋白，免疫一只小鼠需要300ug蛋白，免疫一只豚鼠需要1.6mg蛋白，免疫一只大鼠需要1.6mg蛋白。

　　5、蛋白的纯度大于85%。

　　6、分子量小于20KD的蛋白免疫效果可能不理想。

　　7、变性蛋白免疫产生的抗体跟天然蛋白有可能不发生抗原抗体反应。